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更新時(shí)間:2024-07-04
簡(jiǎn)要描述:
雞白痢雞傷寒抗體檢測(cè)試劑盒雞白?。≒ullorum Disease,PD)雞傷寒(Fowl Typhoid,FT)抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)雞血清中的雞白痢雞傷寒抗體,用于雞群的雞白痢雞傷寒的血清學(xué)輔助診斷。本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過(guò)溫育后,若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的
雞白痢雞傷寒抗體檢測(cè)試劑盒
雞白?。?/span>Pullorum Disease,PD)雞傷寒(Fowl Typhoid,FT)抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)雞血清中的雞白痢雞傷寒抗體,用于雞群的雞白痢雞傷寒的血清學(xué)輔助診斷。
本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過(guò)溫育后,若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
組份
1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1/2塊 | 7 | 終止液 | 6/11ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 11/21ml | 8 | 陰性對(duì)照 | 0.8/1.6ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50ml | 9 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 0.8/1.6ml |
4 | 底物A液 | 6/11ml | 10 | 血清稀釋 | 1/2塊 |
5 | 底物B液 | 6/11ml | 11 | 封板膜 | 2/4張 |
6 | 樣本稀.釋液 | 50/100ml | 12 | 說(shuō)明書 | 1份 |
需自備的設(shè)備及試劑
微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
一次性移液器吸頭。
量筒:500ml。
96孔板酶標(biāo)儀。
蒸餾水或去離子水。
洗瓶或洗板機(jī)。
樣品制備
取動(dòng)物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血。
洗滌液的準(zhǔn)備
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1:99的體積比稀釋待檢血清(例如:495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清)。
注意:陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。
注意事項(xiàng)
試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。
不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
TMB(底物B液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2~8℃)。
所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得很好的結(jié)果。操作過(guò)程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精確。
血清稀釋板為一次性用品,不得重復(fù)使用;血清稀釋板的大容量為300μl/孔。
操作步驟
1. 取預(yù)包被的檢測(cè)板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔,取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl
分別加入反應(yīng)孔中,空白對(duì)照僅加入100μl樣本稀.釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
2. 蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,加滿液體后停留1分鐘,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)3次,后在干凈吸水紙上拍干。
4. 每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌3次, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔先加底物液50µl、再加顯色液50µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
1. 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
結(jié)果判定
以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))讀取吸光度A值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔A450值大于或等于0.5,陰性對(duì)照孔A450值必須小于0.15。如果試驗(yàn)無(wú)效,試驗(yàn)中的操作值得懷疑,試驗(yàn)應(yīng)重做,并仔細(xì)檢察各組分。
樣品A450值大于0.2+陰性對(duì)照孔均值,判為陽(yáng)性;樣品A450值小于0.2+陰性對(duì)照孔均值,判為陰性;如陰性對(duì)照孔均值小于0.05按0.05計(jì)算。
貯存方法: 2 - 8oC下貯存。
有效期: 12個(gè)月。