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禽白血病病毒抗原檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問量:1105

更新時間:2020-06-12

簡要描述:

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(DAS-ELISA)原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原。檢測時,在相應(yīng)的反應(yīng)孔中加入陰、陽對照品和待測樣品,經(jīng)溫育后,若樣品中含有P27抗原,則與酶標板上的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物,反之則不能結(jié)合。洗滌后,加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合。再次洗滌后加入底物,酶催化底物反應(yīng)呈現(xiàn)藍色,顏

詳細說明:

禽白血病病毒抗原檢測試劑盒

組份

預(yù)包被板條 1/2塊 7 陰性對照 2ml

酶結(jié)合物 11/22ml 8 陽性對照 2ml

3 25倍濃縮洗滌液 30/60ml 9 封板膜 2/4張

底物A液 8/16ml 10 說明書 1份

底物B液 8/16ml      

終止液 6/11ml      

 

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(DAS-ELISA)原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原。檢測時,在相應(yīng)的反應(yīng)孔中加入陰、陽對照品和待測樣品,經(jīng)溫育后,若樣品中含有P27抗原,則與酶標板上的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物,反之則不能結(jié)合。洗滌后,加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合。再次洗滌后加入底物,酶催化底物反應(yīng)呈現(xiàn)藍色,顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關(guān),從而達到快速檢測的目的。

 

需自備的設(shè)備及試劑

酶標儀(650 nm)、去離子水、離心管、微量移液器、計時器、離心機(4000r/min)、棉簽、氯化鈉、  、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀等。

 

注意事項

 

  本品僅供體外檢測使用。

 

  不同批號試劑盒中的組份不可混用。

 

勿使用過期的試劑盒,已開封的組份應(yīng)在有效期內(nèi)       使用。

 

必須使用符合藥典規(guī)定的水(如蒸餾水、去離子水或純水)稀釋洗滌液。

 

試劑盒各組份在使用前應(yīng)預(yù)先平衡至室溫(25±2℃)。

 

未使用的酶標板應(yīng)放回鋁箔袋并封口,2-8℃保存。

 

應(yīng)避免使用金屬類物質(zhì)盛裝和攪拌試劑。

 

勿將底物溶液暴露于強光下。

 

本品終止液為強酸,避免同眼、皮膚接觸。

 

移液系統(tǒng)應(yīng)保證準確清潔,應(yīng)提供準確溶液體積的同時不造成交叉污染。

 

操作方法

一:試劑配制

a)0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:準確稱取氯化鈉 8.0 g、   0.2 g、磷酸氫二鈉1.14 g和磷酸二氫鉀0.24 g,加入去離子水溶解并定容至1 L。

b)洗滌工作液:使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫(20-25℃),并搖動,使沉淀溶解(*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min),然后用蒸餾水作25 倍稀釋(例如:30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水)勻,稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日。

二:樣品處理

蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子:取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/L,pH 值 7.4)中,-20℃以下冰箱中凍融一次,待其恢復(fù)至室溫后,取 100 μL 進行檢測。 疫苗:疫苗稀釋液將疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后,取100μL進行檢測。 胎糞:無需稀釋,可以直接用于檢測,若樣品中含有沉淀或雜質(zhì),需在2000-3000 r/min,離心 10 min,取 100 μL 上清進行檢測。

三:操作步驟

取酶標板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),陰性對照、陽性對照和待檢樣品各取100 μL加至相應(yīng)微孔中,蓋好蓋板膜,輕輕振蕩酶標板10 s,充分混

勻,室溫下(25±2℃)避光反應(yīng)60 min。

注:陰、陽性對照各設(shè)2孔,待檢樣品設(shè)1孔。

甩掉孔中的溶液,每孔加入稀釋好的洗滌液300μL,震蕩洗滌4次,每次30s 左右,在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標記物工作液,蓋好蓋板膜,室溫下(25±2℃)避光反應(yīng)60 min。 棄去孔中的溶液,洗滌4次,方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻,加入孔中,100 μL/孔,蓋上蓋板膜,室溫下(25±2℃)反應(yīng)15 min。

注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min內(nèi)使用。

每孔加入終止液100μL,5 min內(nèi)測定結(jié)果。

注:若終止液出現(xiàn)絮狀結(jié)晶,可37℃加熱,待其溶解后使用。

 

 

結(jié)果判定

 

在酶標儀上讀各孔OD650nm值,計算出陰性對照孔OD均值NC和陽性對照孔OD均值PC。

注:NC值<0.200且0.500<PC值≤2.000,試驗結(jié)果才有效。否則,應(yīng)進行重復(fù)試驗。

按照公式計算出S/P值:S/P=(SC-NC)/(PC-NC)。

注:SC為被檢樣品孔OD值。

如果S/P<0.17,說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P≥0.17,說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白。

 

有效期

貯存方法: 2 - 8oC下貯存。

有效期: 12個月。

 

禽白血病是由禽C型反錄病毒群的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱,主要是淋巴細胞性白血病,其次是成紅細胞性白血病、成髓細胞性白血病。此外還可引起骨髓細胞瘤、結(jié)締組織瘤、上皮腫瘤、內(nèi)皮腫瘤等。大多數(shù)腫瘤侵害造血系統(tǒng),少數(shù)侵害其他組織

 



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