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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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更新時間:2020-06-09
簡要描述:
豬瘟抗體檢測試劑盒豬瘟抗原檢測安全試劑盒豬瘟E2(CSFV-E2)抗體ELISA檢測試劑盒,可以從豬的血液樣品中檢測到CSFV-E2抗體的量。微量板用CSFV-E2蛋白包被,將稀釋的豬血清樣品加入到微量孔中,樣品中CSFV-E2抗體將與包被的抗原形成抗原抗體復(fù)合物。非特異性抗體和其它血清蛋白被洗去。將堿性磷酸酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體加入孔中,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,然后再洗去未反應(yīng)的結(jié)合物
豬瘟抗原檢測安全試劑盒
豬瘟E2(CSFV-E2)抗體ELISA檢測試劑盒,可以從豬的血液樣品中檢測到CSFV-E2抗體的量。微量板用CSFV-E2蛋白包被,將稀釋的豬血清樣品加入到微量孔中,樣品中CSFV-E2抗體將與包被的抗原形成抗原抗體復(fù)合物。非特異性抗體和其它血清蛋白被洗去。將堿性磷酸酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體加入孔中,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,然后再洗去未反應(yīng)的結(jié)合物。PNPP顯色劑作為底物被加入,如果CSFV-E2抗體存在,則顯黃色。顏色強(qiáng)度直接與樣品中的該抗體的量有關(guān)。
提供的試劑
包被板(Coated plates):包被重組豬瘟E2蛋白抗原的微量板。
酶標(biāo)二抗(Conjugate reagent):堿性磷酸酶標(biāo)記的抗豬抗體:內(nèi)含蛋白穩(wěn)定劑紅色染料的磷酸鹽緩沖液。
底物片(Substrate tablets) PNPP(4-**苯磷酸二鈉鹽):用底物緩沖液溶解后使用。
底物緩沖液(Substrate buffer):含有與酶反應(yīng)相關(guān)物質(zhì)的二乙醇胺緩沖液。
終止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺緩沖液。
樣品稀釋液(Sample Diluent):含有蛋白穩(wěn)定劑
洗液(Wash Buffer):含有吐溫的磷酸鹽緩沖液(粉)。
陰性對照(Negative Control):滅活的無CSFV抗體的磷酸鹽緩沖液:內(nèi)含有蛋白穩(wěn)定劑和die氮化鈉防腐劑(0.1% 重量/體積)及藍(lán)色染料。
陽性對照(Positive Control):含特異性CSFV抗體的磷酸鹽緩沖液:內(nèi)含有蛋白穩(wěn)定劑和die氮化鈉防腐劑(0.1% 重量/體積)及紅色染料。
材料和設(shè)備要求(試劑盒未提供)
精確的微量移液器和一次性吸頭
8或12孔道的微量移液器
稀釋樣品的塑料管
蒸餾水或去離子水
含405nm波長的酶標(biāo)儀
注意事項
1.處理各種試劑要小心。終止液中含有腐蝕性的強(qiáng)堿,如果濺到皮膚或眼中,用大量的清水洗滌。
2.把各種生物材料都看成具有潛在的生物危險性物,包括所有的外來樣品。在銷毀之前,要用漂白粉或其它強(qiáng)氧化劑,將用過的反應(yīng)板和廢棄液進(jìn)行消毒。
3.不要用嘴碰移液器。在使用試劑盒中的試劑和處理樣品的地方,不要吃東西,喝水或吸煙。
4.試劑盒僅供體外使用。
5.嚴(yán)格按照檢測規(guī)程操作才能取得較好的結(jié)果。
試劑的準(zhǔn)備
1.底物試劑:取1片底物放入潔凈容器中,加入5.5-6ml的底物緩沖溶液,混合直到*溶解。本試劑很好是現(xiàn)用現(xiàn)配,配置好的底物溶液可以在+4℃下避光保存1周。請勿用手直接觸拿底物片。
2.洗液:將1袋洗液*倒入1升蒸餾水或去離子水中,混合使其*溶解。洗液可在+4℃保存1個月。
3.試劑盒中的其它成分可以直接使用,使用前要回溫至室溫(22-27℃)。
樣品的準(zhǔn)備
每個樣品按照1:30稀釋,即在樣品稀釋板上用10μl樣品加290μl的樣品稀釋液,并在預(yù)稀釋板上記錄好樣品和對照的位置。
1.用旋渦混合器或振蕩器混合均勻。
2.每份樣品都要換一個未用過的新的吸頭。
試劑盒中的陽性和陰性對照不要稀釋?。?/span>
BioChek公司的CSFV-E2試劑盒可以通過兩種方式來進(jìn)行實驗:一種是樣品孵育過夜來提高其敏感性;另一種是孵育較少時間來進(jìn)行快速診斷。
雙重測試操作步驟
1.從密封袋中取出用CSFV-E2包被的反應(yīng)板,在記錄紙上記錄樣品的位置。
2.在A1和B1孔中加入100μl的陰性對照。
3.在C1和D1孔中加入100μl的陽性對照。
4.將100μl稀釋好的樣品加入到相應(yīng)的板孔中,用蓋子蓋住反應(yīng)板,在室溫(22-27℃)下孵育60分鐘。孵育過夜(4-8℃)來提高其敏感度。
5.倒出孔中的內(nèi)容物,用洗液洗4次(每孔300μl)。后一次倒轉(zhuǎn)反應(yīng)板,在吸水紙上輕輕拍打。
6.各孔加100μl酶標(biāo)二抗,用蓋子蓋住反應(yīng)板,在室溫(22-27℃)下孵育30分鐘。
7.重復(fù)步驟5。
8.各孔加100μl底物試劑,用蓋子蓋住反應(yīng)板,在室溫(22-27℃)下孵育15分鐘。
9.各孔加100μl終止液,終止反應(yīng)。
10.空氣調(diào)零,以405nm的波長于酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度。
結(jié)果
為確保試驗有效,陰性對照的平均吸光度應(yīng)該小于0.35,陽性對照的平均值和陰性對照的平均值之差應(yīng)大于0.15。
實驗室中溫度的差異會造成OD值的偏高或偏低。根據(jù)實驗對照的結(jié)果判定實驗的有效性。
結(jié)果判定
樣品中抗體的相對含量可以參考陽性對照來計算,其關(guān)系可以通過S/P值(樣品和陽性對照的比值)來計算。
1.S/P值的計算
樣品的S/P值大于或等于0.5認(rèn)為是陽性。
2.抗體滴度的計算
Log10效價=1.1×Log10S/P + 3.361
逆對數(shù)=效價
3.判定標(biāo)準(zhǔn)
S/P值效價范圍抗體狀況
≤0.499 ≤1070 陰性
≥0.500 ≥1071 陽性
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