PCR即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。
PCR試劑盒是一項DNA體外合成放大技術(shù),能快速特異地在體外擴增一定長度的DNA段??捎糜诨蚍蛛x克隆,序列分析,基因表達調(diào)控,基因多態(tài)性研究等許多方面,且價格合適。
PCR試劑盒的使用注意事項有哪些:
注意事項一:保存
未拆封的試劑盒,請于-20℃保存;拆封之后,應在4℃保存。
在試劑消耗量較少的實驗室,可以考慮將按照組分單獨分裝,后保存在-20℃。
注意事項二:配置
試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物,在靜置情況下會發(fā)生分層現(xiàn)象,因此,現(xiàn)配現(xiàn)用,震蕩混勻,避免反復凍融,避免預混。其中,反復凍融將大幅縮短使用壽命。
在擴增體系的選擇時,盡量選擇標準體系,再根據(jù)檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補足擴增體系。
注意事項三:切勿預混
因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達到它的較適溫度,但也可能發(fā)生與引物結(jié)合,導致實驗結(jié)果出現(xiàn)丟位點或者雜合子純化等情況。
注意事項四:陰陽性參照
實驗結(jié)果會受提取、擴增和電泳等多個環(huán)節(jié)的影響,因此,每次擴增實驗都應該添加一組陰陽性參照。這樣,當結(jié)果異常的時,我們就可以結(jié)合陰陽性參照的表現(xiàn),排查問題出在哪個環(huán)節(jié)。
注意事項五:陽性參照是否通用
雖然多數(shù)試劑盒的陽性參照都是007,但是案件試劑盒和建庫試劑盒的陽性參照濃度不同,通常來說案件試劑盒的濃度更低。
注意事項六:擴增程序
擴增程序是能夠?qū)⒃噭┖懈笮馨l(fā)揮出來而設(shè)計,切勿隨意更改;再者,不同試劑盒所含酶的升溫模式也有不同,因此,在設(shè)置擴增程序時,要選擇對應的升溫模式。