收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。其方法如下:
1、肝素抗凝:
常用的抗凝劑,一般情況下對相關(guān)指標(biāo)都不會有干擾,同時抗凝比例較大(抗凝劑: 全血=1:30),對血液基本沒有稀釋影響。
肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖,帶有強大的負(fù)電荷,具有加強抗凝血酶III滅活絲 氨酸蛋白酶的作用,從而阻止凝血酶的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測,是電解質(zhì)檢測的*選擇,檢驗血標(biāo)本中的鈉離子時,不能使用肝素鈉,以免影響檢測結(jié)果。也不能用于白細(xì)胞計數(shù)和分類,因肝素會引起白細(xì)胞聚集。 盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別,但肝素鋰還是被認(rèn)為是的。這主要是人們認(rèn)為肝素鈉可使鈉的測定值偏高,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定)。
肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,可影響PCR 的實驗結(jié)果??刹捎靡恍┓椒ㄏ嗡氐囊种菩?yīng),如利用肝素酶,或在分離白細(xì)胞后用緩沖液洗滌白細(xì)胞兩次以上等。然而,許多實驗工作者仍不愿意在進(jìn)行分子生物學(xué)實驗時采用肝素作抗凝劑。
2、EDTA抗凝:
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會將鈣從 反應(yīng)點移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。由于EDTA會螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失,具體看客戶測定的指標(biāo)來選擇,做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。
3、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦為3.2%或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量,以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9),對血液有一定的稀釋,一般不建議。
選擇抗凝的注意點:
①.每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②.收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③.抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿);
④.抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后 用于測定。
血清、血漿收集好后,暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。